蛋白質(zhì)技術手冊

第一章 蛋白質(zhì)分離的準備
1?1 引言
1?2 緩沖液
1?2?1 緩沖液的性質(zhì)
1?2?2 緩沖液配制
1?2?3 濃度對緩沖液pH值的影響
1?2?4 某些緩沖液使用時的注意事項
1?2?5 防止緩沖液受污染
1?2?6 水的純度
1?3 鹽、金屬離子和螯合劑
1?3?1 離子強度
1?3?2 二價陽離子
1?3?3 螯合劑
1?4 還原劑
1?4?1 總則
1?4?2 特殊情況
1?5 去垢劑
1?5?1 去垢劑的分類
1?5?2 蛋白質(zhì)溶解的初始操作步驟
1?6 蛋白質(zhì)的環(huán)境因素
1?6?1 表面效應
1?6?2 溫度
1?6?3 儲存
1?7 蛋白酶抑制劑
1?7?1 常用抑制劑
1?7?2 蛋白酶抑制劑混合使用
第二章 蛋白質(zhì)的提取和溶解
2?1 引言
2?2 細胞破碎和蛋白質(zhì)溶解
2?2?1 勻漿
2?2?2 超聲
2?2?3 高壓勻漿
2?2?4 研磨
2?2?5 (高速)珠磨
2?2?6 酶溶
2?2?7 化學滲透
2?2?8 其他方法
2?3 包涵體蛋白質(zhì)的溶解
2?3?1 包涵體蛋白質(zhì)的溶解及復性
2?3?2 防止包涵體形成
第三章 蛋白質(zhì)濃度測定
3?1 280納米(A280)光吸收法
3?1?1 提要
3?1?2 設備
3?1?3 試劑
3?1?4 操作步驟
3?1?5 注意事項
3?2 Bradford檢測法
3?2?1 提要
3?2?2 設備
3?2?3 試劑
3?2?4 操作步驟
3?2?5 注意事項
3?3 Lowry檢測法
3?3?1 提要
3?3?2 設備
3?3?3 試劑
3?3?4 操作步驟
3?3?5 注意事項
3?4 二喹啉甲酸(BCA)檢測法
3?4?1 提要
3?4?2 設備
3?4?3 試劑
3?4?4 操作步驟
3?4?5 注意事項
3?5 斑點濾膜結合法
3?5?1 概述
3?5?2 操作步驟
3?6 干擾物質(zhì)表
第四章 蛋白質(zhì)溶液的濃縮
4?1 分析方法
4?1?1 三氯醋酸沉淀法
4，1?2 丙酮沉淀法
4?1?3 免疫沉淀法
4?2 制備方法
4?2?1 硫酸銨沉淀法
4?2?2 有機溶劑沉淀法
4?2?3 聚乙二醇沉淀法
4?2?4 超濾法
4?2?5 透析法
4?2?6 離子交換層析和冷凍干燥法簡述
第五章 變性條件下的凝膠電泳
5?1 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳
5?1?1 原理
5?1?2 設備
5?1?3 制膠
5?1?4 制備樣品和上樣
5?1?5 電泳
5?1?6 考馬斯亮藍染色
5?1?7 銀染色
5?1?8 干膠
5?1?9 討論
5?1?10 安全注意事項
5?2 梯度膠
5?2?1 引言
5?2?2 儀器
5?2?3 凝膠的制備
5?3 SDS-尿素膠
5?3?1 引言
5?3?2 制膠
5?4 其他方法
5?4?1 放射性標記樣品的檢測
5?4?2 分子量的測定
5?4?3 蛋白質(zhì)定量
5?4?4 電泳后蛋白質(zhì)的洗脫
第六章 非變性條件下的凝膠電泳
6?1 引言
6?2 不連續(xù)非變性凝膠電泳
6?2?1 設備
6?2?2 制膠
6?2?3 樣品制備
6?2?4 電泳
6?2?5 凝膠染色
6?2?6 連續(xù)非變性凝膠電泳
6?3 相關的方法
6?3?1 蛋白質(zhì)分子量的測定
6?3?2 電泳后酶活性的測定
第七章 等電聚焦和雙向凝膠電泳
7?1 等電聚焦
7?1?1 原理
7?1?2 主要儀器
7?1?3 灌制等電聚焦凝膠
7?1?4 樣品制備和上樣
7?1?5 等電聚焦電泳
7?1?6 聚焦后處理
7?1?7 天然等電聚焦電泳的修正方案
7?1?8 討論
7?2 固相pH梯度等電聚焦電泳
7?2?1 簡介
7?2?2 儀器
7?2?3 制備等電聚焦凝膠
7?2?4 樣品制備和上樣
7?2?5 等電聚焦電泳
7?2?6 聚焦后處理
7?2?7 討論
7?3 雙向凝膠電泳
7?3?1 簡介
7?3?2 儀器
7?3?3 操作步驟
7?3?4 討論
第八章 蛋白質(zhì)的毛細管電泳分析
8?1 引言
8?2 影響分離效率的幾個因素
8?3 柱制備技術
8?3?1 鍵合涂層
8?3?2 吸附涂層
8?4 不同分離條件的影響
8?5 毛細管電泳檢測器
8?6 實驗操作
8?6?1 實驗步驟
8?6?2 操作條件選擇
8?6?3 毛細管區(qū)帶電泳
8?6?4 毛細管等電聚焦
8?6?5 毛細管凝膠電泳
8?6?6 親和毛細管電泳
8?7 應用實例
8?7?1 聚丙烯酰胺涂層毛細管電泳柱的制備
8?7?2 毛細管凝膠電泳分離蛋白質(zhì)
8?7?3 毛細管等電聚焦
第九章 免疫印跡
9?1 引言
9?1?1 免疫印跡用膜
9?1?2 將蛋白質(zhì)固定在膜上的其他應用
9?2 免疫印跡操作
9?2?1 儀器
9?2?2 試劑
9?2?3 操作步驟
9?2?4 其他檢測方法的修正方案
9?2?5 總蛋白質(zhì)染色
9?2?6 免疫印跡清除
9?3 討論
9?3?1 膜的儲存
9?3?2 轉(zhuǎn)移異常
9?3?3 免疫印跡的其他應用
第十章 離子交換層析
10?1 蛋白質(zhì)純化
10?1?1 引言
10?1?2 方法
10?2 蛋白質(zhì)溶液的濃縮
10?3 批量層析
第十一章 凝膠過濾層析
11?1 蛋白質(zhì)的純化
11?1?1 引言
11?1?2 方法
11?2 更換蛋白質(zhì)的緩沖液
第十二章 親和層析
12?1 引言
12?2 親和柱的制備
12?2?1 配基固相化技術
12?2?2 非特異洗脫的策略
12?3 特異分離技術
12?3?1 抗體
12?3?2 核酸
12?3?3 凝集素
12?3?4 染料配基
12?3?5 固相化金屬親和層析
12?3?6 疏水作用層析
第十三章 蛋白質(zhì)的晶體培養(yǎng)――懸滴結晶
13?1 引言
13?2 懸滴結晶法
13?2?1 結晶原理
13?2?2 第一階段操作步驟
13?3 設計最優(yōu)結晶方案
13?3?1 稀溶液基質(zhì)的微調(diào)
13?3?2 初始篩選的擴展
13?3?3 蛋白質(zhì)結晶的靈活性與困難
第十四章 cDNA法推斷蛋白質(zhì)的一級結構
14?1 引言
14?2 一般策略
14?2?1 蛋白質(zhì)的純化和肽段氨基酸序列分析
14?2?2 引物的設計
14?2?3 用PCR擴增目的cDNA片段
14?2?4 cDNA的克隆及測序
14?2?5 cDNA序列的分析及蛋白質(zhì)一級結構的確定
14?3 PK-120的純化及肽段氨基酸序列分析
14?3?1 儀器及材料
14?3?2 PK-120的純化
14?3?3 分離純化肽段及測定氨基酸序列
14?4 部分分解多肽兩端有關的PCR法篩選PK-120基因
14?4?1 儀器及材料
14?4?2 引物設計
14?4?3 PCR擴增
14?4?4 凝膠電泳及提取DNA
14?4?5 測定堿基序列
14?5 PK-12O cDNA克隆
14?5?1 儀器及材料
14?5?2 雜交反應
14?5?3 cDNA推測PK-120一級結構的特征
附錄1 常用化學物質(zhì)分子量
附錄2 一些蛋白質(zhì)的分子量和等電點
附錄3 硫酸銨沉淀劑表
附錄4 分光光度曲線