免疫組織化學實驗技術及應用

第一章 免疫組織化學組織細胞材料的準備
第一節(jié) 組織的取材
一、動物的致死法及取材
二、尸體解剖的取材
三、活檢標本的取材
四、細胞標本的制備
第二節(jié) 組織的固定
一、固定液的種類
二、固定的方法
三、固定的注意事項
四、影響固定的因素
第三節(jié) 組織的脫水、透明、浸蠟及包埋
一、組織的脫水
二、組織的透明
三、組織浸蠟
四、組織包埋
第四節(jié) 組織切片
一、載玻片的處理
二、石蠟切片
三、冰凍切片
四、碳蠟切片
參考文獻
第二章 免疫組織化學的基本技術
第一節(jié) 抗原、抗體的基礎知識
一、抗原的概念
二、抗原的化學結構及抗原決定簇
三、抗原的性質
四、抗體的概念
五、抗體的性質和種類
第二節(jié) 抗體的來源和應用
一、抗體的購置
二、抗體的應用
第三節(jié) 抗原的暴露和修復
一、暴露和修復抗原的原因
二、抗原的暴露
三、熱誘導的抗原修復
四、抗原修復的質量控制
五、抗原修復存在的問題和克服的方法
六、抗原修復和酶消化結合使用
第四節(jié) 顯色系統(tǒng)和襯染方法的選擇
一、HRP底物顯色液的種類和配制
二、HRP顯示系統(tǒng)的增強方法
三、堿性磷酸酶標記的NBT顯色液
四、襯染劑的選擇
參考文獻
第三章 免疫熒光組織化學技術
第一節(jié) 免疫熒光組化技術的基本概念
第二節(jié) 熒光素
一、熒光染料的發(fā)展史和早期應用
二、熒光色素
三、可用于標記抗體的熒光素
四、藻紅蛋白
第三節(jié) 熒光素標記抗體的方法
一、標記方法
二、熒光抗體的質量控制
第四節(jié) 免疫熒光組織化學染色方法
一、直接法
二、間接法
三、補體法
四、雙重免疫熒光細胞化學標記方法
五、對照試驗
第五節(jié) 免疫熒光組織化學的幾種增敏方法
一、親和細胞化學和級聯(lián)抗體信號放大技術
二、CSA法
三、酶標記熒光信號放大技術
第六節(jié) 熒光顯微鏡及檢測方法
一、熒光顯微鏡的原理
二、熒光顯微鏡的部件
三、激發(fā)方式
四、使用熒光顯微鏡的注意事項
五、熒光顯微鏡的維護與保養(yǎng)
六、熒光顯微鏡標本制作要求
七、熒光圖像的記錄方法
第七節(jié) 染色標本的復染、保存及封片介質的制備
一、免疫熒光組織化學的細胞核復染
二、染色標本的保存
三、封片介質的制備
參考文獻
第四章 免疫酶組織化學技術
第一節(jié) 概述
第二節(jié) 酶和底物
一、酶及其特點
二、常用酶及其底物
第三節(jié) 酶標記抗體法
一、標記抗體的制備
二、染色的基本原理
三、染色步驟
四、酶標記抗原法
第四節(jié) 非標記抗體免疫酶法
一、酶橋法
二、PAP法
第五節(jié) 免疫堿性磷酸酶組織化學技術
一、間接免疫堿性磷酸酶法
二、APAAP法
第六節(jié) 多聚螯合物酶法
一、EPOS法
二、EnVision法
三、UIP法
四、PowerVision法
參考文獻
第五章 親和免疫組織化學技術
第一節(jié) 親和素與生物素系統(tǒng)
一、生物素
二、親和素
三、鏈霉親和素
四、基本原理
五、操作流程
第二節(jié) CSA法
一、基本原理
二、酪胺化試劑的制備
三、染色步驟
四、敏感性和存在的問題
五、使用cSA技術的技巧
第三節(jié) 葡萄球菌A蛋白(sPA)
一、SPA的性質
二、SPA各種免疫檢測試劑的制備
三、SPA的應用
第四節(jié) IHC的標準化和自動化
第五節(jié) IHC增敏方法的研究進展及技術改進
一、免疫熒光組織化學技術
二、免疫酶組織化學技術
三、多聚螯合物酶法
四、膠體金屬一抗體復合物方法
五、催化信號放大系統(tǒng)
六、滾動式循環(huán)放大法
七、原位免疫PCR
八、提高IHc方法敏感性的輔助手段
參考文獻
第六章 免疫金銀組織化學技術
第一節(jié) 溶膠的基本概念
一、膠體金
二、膠體金的一般性狀
第二節(jié) 膠體金的制備
一、制備前的準備
二、膠體金分散顆粒的制備
三、膠體金的質量鑒定
第三節(jié) 膠體金探針的制備
一、原理
二、待標記蛋白質的準備
三、膠體金pH值的調整
四、確定膠體金與待標記蛋白質用量
五、蛋白質的膠體金標記
六、膠體金標記蛋白質的純化
七、膠體金探針的質量鑒定
第四節(jié) 光鏡免疫金組織化學染色方法
一、原理
二、IGS間接法染色步驟
第五節(jié) 光鏡免疫金銀組織化學
一、原理
二、IGSS操作流程
三、雙PAG法
第六節(jié) 彩色免疫金銀染色方法
一、操作步驟
二、CIG3SS的優(yōu)點
第七節(jié) 物理顯影液的配制和IGSS的評估
一、物理顯影液的配制
二、IG3SS法的評價及其注意事項
參考文獻
第七章 雙重或多重免疫組織化學標記
第一節(jié) 概述
第二節(jié) 消除雙重染色間交叉反應的方法
一、分步固定法
二、解離洗脫法
三、位點封閉法
第三節(jié) 光鏡下的雙重及多重免疫標記染色
一、雙重或多重免疫熒光標記染色
二、雙重或多重免疫酶標記染色
三、其他雙重標記法染色
第四節(jié) 電鏡下的雙重及多重免疫標記
一、標記方法
二、操作
第五節(jié) 雙重或多重標記的注意事項
參考文獻
第八章 免疫組織化學結果的分析和判斷
第一節(jié) 免疫組織化學結果的判斷原則
第二節(jié) 對照染色設計
一、陽性對照
二、陰性對照
三、自身對照
第三節(jié) 非特異染色
一、非特異染色的原因
二、消除非特異染色的方法
第四節(jié) 染色失敗的原因及其處置方法
一、對照切片和待檢組織切片均不著色
二、陰性對照切片沒有染色，而陽性對照標本和待檢測組織切片呈弱陽性
三、切片染色太深或整張切片均出現(xiàn)染色
四、切片上有許多雜質
五、沒有復染色或復染色過淺
六、復染色太深或復染和DAB呈色反差太小
七、待測組織標本未按所期望的表達(胞質及核)
八、所有切片包括陰性對照切片均呈現(xiàn)弱陽性反應
九、所有切片均出現(xiàn)非特異性背景染色
十、陽性對照切片顯色良好，而待檢測切片均無陽性反應，呈現(xiàn)假陰性
十一、待檢測切片著色不勻
參考文獻
第九章 原位雜交探針的種類和標記方法
第一節(jié) 探針的類型和制備
一、DNA探針
二、RNA探針
三、寡核苷酸探針
第二節(jié) 探針標記的基本原理
一、標記物
二、標記方法
三、標記探針的純化
四、標記結果的檢驗
第三節(jié) 探針標記的技術
一、核素標記
二、生物素標記
三、地高辛標記
四、熒光素標記
五、聯(lián)合標記
六、常用的探針標記技術
參考文獻
第十章 原位核酸分子雜交技術
第一節(jié) 原位核酸分子雜交技術的原理
第二節(jié) 原位分子雜交技術的基本方法
一、固定
二、玻片和組織切片的處理
三、雜交
四、雜交后處理
五、顯示
六、對照實驗和結果的判斷
第三節(jié) 原位DNA分子雜交方法
一、地高辛(Dig)標記DNA探針在
石蠟切片檢測病毒DNA的方法
二、生物素標記HPvDNA探針在石蠟
切片上檢測HPv-DNA的方法
第四節(jié) RNA原位核酸雜交方法
一、基本原理
二、RNA原位雜交
三、cRNA探針檢測組織切片中RNA的原位雜交
四、冰凍切片的地高辛標記RNA探針的原位雜交操作程序
五、用寡核苷酸探針檢測組織切片中RNA的原位雜交
六、用cDNA探針檢測體外培養(yǎng)細胞中
RNA的原位雜交
第五節(jié) 熒光原位雜交(FIsH)技術
一、FISH的概念
二、雜交類型和方法
三、雜交失敗或雜交信號弱的原因
四、可用于FISH檢測的探針
第六節(jié) 原位PCR檢測技術
一、原位PCR技術特點
二、直接法原位PCR擴增
三、間接法原位PCR擴增
四、應注意的問題
五、對照實驗
第七節(jié) 電鏡原位核酸分子雜交技術
一、概述
二、電鏡原位雜交的種類
三、電鏡原位雜交的注意事項
四、電鏡原位雜交(包埋前、后)操作流程
參考文獻
第十一章 組織芯片的制備和應用
第一節(jié) 組織芯片的研究進展
一、TMA的研究進展
二、TMA的分類
第二節(jié) 組織芯片的制備
一、石蠟塊組織芯片的制備
二、冰凍組織的組織芯片制備
三、細胞芯片的制備
第三節(jié) 組織微陣列的應用
一、在腫瘤研究中的應用
二、其他方面的應用
第四節(jié) TMA的優(yōu)點和存在的問題
一、TMA的優(yōu)點
二、TMA存在的問題
三、應用前景和有待解決的問題
參考文獻
第十二章 細胞凋亡的檢測技術
第一節(jié) 細胞凋亡的基本概念和特征
一、基本概念
二、基本特征
第二節(jié) 細胞凋亡的形態(tài)學檢測方法
一、HE染色
二、甲基綠一派若寧染色法
三、吖啶橙染色法
四、Hoechst 33258染色法
五、磷脂酰絲氨酸外翻檢測方法
六、透射電鏡觀察方法
七、其他的檢測方法
第三節(jié) 細朐凋亡的凝膠電泳榆測法
一、常規(guī)方法
二、快速法
三、連接介導PCRladder檢測
第四節(jié) 流式細胞儀檢測方法
一、激光散射光分析
二、細胞膜完整性及膜轉運功能的測定
第五節(jié) 細胞器功能的檢測
一、線粒體跨膜電位的測定
二、溶酶體功能的檢測
第六節(jié) 原位末端標記方法
一、DNA缺口平移法
二、TUNEL檢測方法
三、TuNEL檢測時的注意事項
第七節(jié) 激光掃描細胞形態(tài)分析方法
第八節(jié) 存在的問題與發(fā)展方向
一、如何選擇細胞凋亡的研究方法
二、細胞凋亡和細胞壞死的界定
三、其他的檢測方法
參考文獻
第十三章 Ig和TCR基因重排檢測原理與方法
第一節(jié) 概述
第二節(jié) 基因重排的PcR檢測
一、模板DNA制備
二、DNA濃度和純度的測定
三、DNA質量的檢測
四、DNA的PCR擴增
五、PCR產物的電泳和銀染
六、PcR擴增產物的分析
第三節(jié) 克隆性基因重排與臨床診斷
一、克隆性基因重排為提示惡性的重要指標
二、克隆性基因重排的敏感性和覆蓋面
三、克隆性基因重排對區(qū)分淋巴瘤T細胞、B細胞來源的作用
四、克隆演化
五、克隆性基因重排和MRD檢測
六、克隆性基因重排與交界性淋巴組織增生性疾病
七、克隆性基因重排與易發(fā)生淋巴瘤的疾病
參考文獻
第十四章 電鏡細胞化學技術
第一節(jié) 電子顯微鏡的基本知識
一、工作原理
二、分辨率和放大倍數
三、電鏡的反差與成像
第二節(jié) 免疫電鏡技術
一、免疫電鏡技術的基本方法
二、透射免疫電鏡技術基本操作步驟
三、包埋前膠體金標記免疫電鏡技術操作流程
四、包埋后免疫電鏡技術操作流程
五、雙重或多重免疫電鏡標記法
六、鐵蛋白標記免疫電鏡技術
七、掃描免疫電鏡技術
八、冷凍蝕刻免疫電鏡技術
第三節(jié) 電鏡酶細胞化學技術
一、電鏡酶細胞化學基本原理
二、電鏡酶細胞化學樣品制備流程
三、常用酶細胞化學孵育液配方及反應條件
四、酶細胞化學必須注意的問題
第四節(jié) 電子顯微鏡的其他常用細胞化學技術
一、離子細胞化學技術
二、陰離子位點顯示技術
三、自由基顯示技術
四、示蹤細胞化學
五、凝集素顯示糖類細胞化學
六、乙酰膽堿受體顯示細胞化學
七、細胞膜糖類電鏡顯示法
第五節(jié) 電鏡負染色和免疫放射自顯影技術
一、電鏡負染色技術
二、電鏡免疫放射自顯影術
參考文獻
第十五章 常用特殊染色技術
第一節(jié) 結締組織染色技術
一、膠原纖維染色
二、網狀纖維與膠原纖維染色
三、彈力纖維與膠原纖維染色
四、結締組織三色染色法
五、膠原蛋白、彈力蛋白和黏蛋白
染色
第二節(jié) 肌肉組織染色技術
一、橫紋肌組織染色
二、早期心肌組織病變染色
第三節(jié) 神經組織染色技術
一、神經尼氏體染色
二、神經纖維染色
三、神經髓鞘染色
第四節(jié) 脂質染色技術
一、油紅0染色
二、蘇丹Ⅲ染色
第五節(jié) 糖類染色技術
一、糖原染色
二、黏液物質染色
三、羊水角化鱗狀上皮的角蛋白染色
第六節(jié) 色素類染色技術
一、含鐵血黃素染色
二、膽色素染色
三、黑色素染色
四、脂褐素染色
第七節(jié) 病理的內源性沉著物染色技術
一、纖維素染色
二、淀粉樣物質染色
第八節(jié) 病原微生物染色技術
一、真菌染色
二、細菌染色
三、抗酸桿菌染色
四、乙型肝炎表面抗原染色
第九節(jié) 肥大細胞和鈣質染色技術
一、肥大細胞染色
二、鈣質染色
第十節(jié) 核酸染色技術
一、DNA染色
二、核仁組成區(qū)嗜銀蛋白染色
參考文獻
第十六章 免疫組織化學常用抗體標記譜系
第一節(jié) 上皮細胞標志
一、廣譜上皮標志
二、選擇性上皮標志
第二節(jié) 間葉細胞標志
一、廣譜間葉標志
二、肌源性標志
三、血管內皮標志
四、纖維組織細胞標志
五、間皮細胞標志
六、其他間葉標志
第三節(jié) 神經組織標志
一、廣譜神經標志
二、選擇性神經標志
第四節(jié) 神經內分泌細胞標志
一、垂體激素
二、胰島激素
三、甲狀腺激素
四、其他激素
第五節(jié) 淋巴造血細胞標志
一、廣譜淋巴細胞標志
二、B淋巴細胞標志
三、NK／T淋巴細胞標志
四、霍奇金細胞相關標志
五、其他標志
第六節(jié) 腫瘤相關抗原
第七節(jié) 細胞增殖標志
第八節(jié) 細胞凋亡抗體
第九節(jié) 癌基因和抑癌基因相關抗體
第十節(jié) 腫瘤細胞耐藥標志
第十一節(jié) 性激素受體標志
第十二節(jié) 細胞黏附分子抗體
第十三節(jié) 病原微生物抗體
參考文獻
第十七章 免疫組織化學在病理診斷及研究中的應用
第一節(jié) 腫瘤分類中的應用
一、上皮細胞及其腫瘤
二、間葉細胞及其腫瘤
三、神經源性腫瘤
四、神經內分泌腫瘤
五、淋巴造血組織腫瘤
第二節(jié) 腫瘤免疫組織化學鑒別診斷
一、小圓細胞腫瘤
二、梭形細胞腫瘤
三、上皮樣腫瘤
四、多形性腫瘤
五、腺泡狀腫瘤
六、黏液樣腫瘤
七、轉移性腫瘤
第三節(jié) 腫瘤細胞耐藥性中的應用
一、P糖蛋白
二、多耐藥相關蛋白
三、肺耐藥相關蛋白
四、拓撲異構酶
五、谷胱甘肽S轉移酶
六、金屬硫蛋白
七、藥物代謝酶類——胸苷酸合成酶
第四節(jié) 腫瘤性激素受體中的應用
一、概述
二、雌激素受體
三、孕激素受體
四、雌激素調節(jié)蛋白
五、雄激素受體
第五節(jié) 腫瘤細胞增殖活性中的應用
一、生長分數
二、增殖活性與預后
三、增殖活性與治療
第六節(jié) 腫瘤細胞凋亡中的應用
第七節(jié) 腫瘤相關基因中的應用
一、癌基因
二、腫瘤抑制基因
第八節(jié) 病原微生物檢測
一、人乳頭狀瘤病毒(HPV)
二、EB病毒(EBV)
三、乙型肝炎病毒(HBV)
四、幽門螺桿菌(HP)
參考文獻
第十八章 腫瘤免疫組化標記的形態(tài)學特征及其意義
第一節(jié) 陽性標記的顯色特征
一、陽性標記的色度特征
二、陽性標記的強度特征
三、陽性細胞的量化標準
第二節(jié) 抗原在細胞中的定位
一、胞膜型表達
二、胞核型表達
三、胞質型表達
四、胞膜一質型表達
五、胞核一質型表達
第三節(jié) 陽性標記的組織學特征
一、局灶型
二、彌漫型
三、片塊型
四、網狀型
五、腺管型
六、腔緣型
七、其他類型
第四節(jié) 陰性結果及其意義
一、完全陰性
二、部分陰性
第五節(jié) 影響抗原定位的主要因素
一、組織結構不清晰
二、組織細胞特殊結構
三、非特異染色的干擾
第六節(jié) 腫瘤抗原異常表達
一、腫瘤細胞不同分化階段異常表達
二、腫瘤細胞抗原異位表達
三、腫瘤細胞異常分化
四、抗體交叉反應
五、腫瘤細胞吸附和吞噬
參考文獻
附錄
附錄I免疫組織化學和原位雜交常用操作流程
一、IHC常用方法操作流程
二、原位雜交操作流程
附錄Ⅱ免疫組織化學常用緩沖液
附錄Ⅲ原位雜交組織化學常用試劑及
配制
附錄Ⅳ各種市售常用酸堿的濃度
附錄V玻璃及塑料器皿的硅烷化
附錄Ⅵ蛋白質含量的測定方法
附錄Ⅶxgal染色方法