分子生物學與基因組學

引言
第一版前言
致謝
1 什么是分子生物學？
　1.1 分子生物學基礎(chǔ)知識：讓初學者認識分子世界
　1.2 分子生物學基本要求
　1.3 實驗室安全
2 基本方法介紹
　2.1 核酸的差異
　2.2 核酸沉淀濃縮
　　2.2.1 乙醇沉淀法
　　2.2.2 濃縮裝置
　　2.2.3 冷凍干燥
　　2.2.4 鹽析
　2.3 核酸純化
　　2.3.1 酚氯仿抽提純化法
　　2.3.2 聚乙二醇沉淀法
　　2.3.3 蛋白結(jié)合濾膜純化法
　　2.3.4 陰離子交換柱純化法
　　2.3.5 玻璃乳純化法
　　2.3.6 氯化銫密度梯度離心法
　　2.3.7 透析法
　2.4 核酸濃度測定
　　2.4.1 分光光度計法
　　2.4.2 瓊脂糖凝膠電泳法
　　2.4.3 點量化法
　　2.4.4 熒光定量法
　　2.4.5 核酸檢測計法
　　2.4.6 酶標志法
　2.5 DNA制備方法
　　2.5.1 質(zhì)粒DNA的小量制備
　　2.5.2 質(zhì)粒DNA的大量制備
　　2.5.3 細菌培養(yǎng)基
　　2.5.4 噬菌體DNA的制備
　　2.5.5 利用輔助噬茵體制備單鏈DNA
　　2.5.6 基因組DNA制備
3 分子生物學工具
　3.1 限制性酶
　　3.1.1 命名法
　　3.1.2 活性測定
　　3.1.3 限制性酶切反應(yīng)
　　3.1.4 限制性酶切難點
　　3.1.5 限制性酶切指南
　3.2 凝膠
　　3.2.1 瓊脂糖凝膠
　　3.2.2 瓊脂糖凝膠中的DNA片段回收
　　3.2.3 聚丙烯酰胺凝膠
　　3.2.4 聚丙烯酰胺凝膠中的DNA片段回收
　　3.2.5 脈沖場凝膠電泳
　　3.2.6 毛細管電泳
　3.3 印跡法
　　3.3.1 Sotlthern印跡法
　　3.3.2 Northern印跡法
　　3.3.3 點印跡法和縫印跡法
4 聚合酶鏈式反應(yīng)
　4.1 標準聚合酶鏈式反應(yīng)
　4.2 改進的聚合酶鏈式反應(yīng)
　　4.2.1 巢式聚合酶鏈式反應(yīng)
　　4.2.2 多重聚合酶鏈反應(yīng)
　　4.2.3 長片段聚合酶鏈反應(yīng)
　4.3 聚合酶鏈式反應(yīng)的應(yīng)用
　　4.3.1 反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(yīng)
　　4.3.2 cDNA末端的快速擴增
　　4.3.3 相同產(chǎn)物擴增
　　4.3.4 經(jīng)典定量聚合酶鏈式反應(yīng)
　　4.3.5 實時定量聚合酶鏈式反應(yīng)
　　4.3.6 反向聚合酶鏈式反應(yīng)
　　4.3.7 Biotin?RAGE聚合酶鏈式反應(yīng)
　　4.3.8 改良引物誘變
　　4.3.9 擴增阻滯突變系統(tǒng)
　　4.3.10 原位聚合酶鏈式反應(yīng)
　　4.3.11 循環(huán)測序
　　4.3.12 cDNA合成
　　4.3.13 單細胞聚合酶鏈式反應(yīng)
5 RNA
　5.1 RNA酶滅活
　5.2 RNA提取方法
　　5.2.1 一步法
　　5.2.2 乙基苯基聚乙二醇裂解法
　　5.2.3 基本信息
　　5.2.4 RNA濃度測定
　5.3 mRNA分離方法
　　5.3.1 購買RNA
　5.4 逆轉(zhuǎn)錄：cDNA合成
　5.5 體外轉(zhuǎn)錄：RNA合成
　5.6 RNA干擾
6 克隆DNA片段
　6.1 克隆的基本要素
　　6.1.1 載體
　　6.1.2 DNA片段
　　6.1.3 補平反應(yīng)
　　6.1.4 DNA定量
　　6.1.5 連接
　　6.1.6 克隆PCR產(chǎn)物
　　6.1.7 用重組酶體系克隆
　6.2 選擇克隆載體
　　6.2.1 質(zhì)粒
　　6.2.2 噬菌體
　　6.2.3 柯斯質(zhì)粒
　　6.2.4 P1人工染色體及細菌人工染色體
　　6.2.5 酵母人工染色體
　6.3 選擇細菌
　6.4 制備感受態(tài)細胞與轉(zhuǎn)化
　　6.4.1 氯化鈣法
　　6.4.2 氯化銣法
　　6.4.3 TSS法
　　6.4.4 電轉(zhuǎn)
　　6.4.5 效價檢測
　6.5 克隆的相關(guān)問題
　6.6 克隆的保存
7 雜交：如何檢測到DNA
　7.1 制備探針
　　7.1.1 制備標記探針的方法
　7.2 雜交
　　7.2.1 雜交緩沖液
　　7.2.2 雜交反應(yīng)體系
　　7.2.3 雜交溫度
　　7.2.4 洗滌
　7.3 標記DNA的驗證
　　7.3.1 放射自顯影技術(shù)
　　7.3.2 非放射性檢測方法
　7.4 重組DNA庫的篩選
　　7.4.1 DNA庫板的制備
　　7.4.2 膜的轉(zhuǎn)移
　　7.4.3 膜的雜交
　　7.4.4 膜的曝光
　　7.4.5 克隆探測
　　7.4.6 今后對庫的篩選
　7.5 雙雜交系統(tǒng)
8 DNA分析
　8.1 測序
　　8.1.1 放射性測序
　　8.1.2 非放射性測序與自動測序單位
　　8.1.3 袖珍型測序
　　8.1.4 焦磷酸測序法
　　8.1.5 測序特性：八聚體
　8.2 分析DNA突變的方法
　　8.2.1 限制性片段長度多態(tài)性
　　8.2.2 單鏈構(gòu)象多態(tài)性
　　8.2.3 變性梯度凝膠電泳
　　8.2.4 時相溫度梯度電泳
　　8.2.5 異源雙鏈核酸分析
　　8.2.6 擴增阻滯突變系統(tǒng)
　　8.2.7 錯配酶切
　　8.2.8 截斷蛋白檢測
9 DNA序列功能的研究
　9.1 組織內(nèi)轉(zhuǎn)錄研究
　　9.1.1 核糖核酸酶保護實驗
　　9.1.2 實時定量PCR實驗
　　9.1.3 原位雜交
　　9.1.4 染色體熒光原位雜交
　　9.1.5 原位聚合酶鏈式反應(yīng)
　　9.1.6 微陣列
　9.2 突變
　9.3 體外翻譯
　9.4 表達系統(tǒng)
　　9.4.1 細菌表達系統(tǒng)
　　9.4.2 桿狀病毒表達系統(tǒng)
　　9.4.3 其他表達系統(tǒng)
　　9.4.4 哺乳動物細胞中的異源表達系統(tǒng)
　　9.4.5 轉(zhuǎn)染方法
　　9.4.6 多基因共轉(zhuǎn)染
　　9.4.7 瞬時和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染
　　9.4.8 報告基因
　9.5 轉(zhuǎn)基因小鼠
　　9.5.1 轉(zhuǎn)基因方法
　9.6 轉(zhuǎn)基因表達調(diào)控
　　9.6.1 四環(huán)素基因表達調(diào)控系統(tǒng)
　　9.6.2 蛻皮素基因表達調(diào)控系統(tǒng)
　9.7 基因治療
　9.8 基因組學
10 計算機應(yīng)用
　10.1 重要事項
　10.2 實踐中存在的問題
11 職業(yè)生涯規(guī)劃建議：針對青年研究者的馬基雅維利短期課程
12 結(jié)束語
附錄1
圖標
標準溶液和細菌培養(yǎng)基
　溶液
　細菌培養(yǎng)基
術(shù)語表
附錄2
供應(yīng)商
推薦文獻
休閑讀物
索引