生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)

第一部分生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)基礎(chǔ)
第1章生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)須知1
1.1生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)的目的1
1.2生化實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)規(guī)則1
1.3生化實(shí)驗(yàn)室安全及防護(hù)知識(shí)2
1.3.1實(shí)驗(yàn)室安全知識(shí)2
1.3.2實(shí)驗(yàn)室急救3
1.4實(shí)驗(yàn)誤差與數(shù)據(jù)處理4
1.4.1系統(tǒng)誤差4
1.4.2偶然誤差4
1.4.3操作錯(cuò)誤5
1.4.4數(shù)據(jù)處理5
1.5實(shí)驗(yàn)報(bào)告6
第2章分光光度技術(shù)7
2.1分光光度技術(shù)原理7
2.1.1光譜7
2.1.2光吸收定律8
2.2分光光度計(jì)的構(gòu)造10
2.2.1光源10
2.2.2單色光器10
2.2.3比色皿12
2.2.4檢測(cè)器12
2.37220型分光光度計(jì)13
2.3.1儀器外部結(jié)構(gòu)及各部分名稱和功能13
2.3.2儀器使用方法15
2.3.3注意事項(xiàng)15
2.4分光光度技術(shù)在生化試驗(yàn)技術(shù)中的應(yīng)用16
第3章離心技術(shù)17
3.1離心技術(shù)的基本原理17
3.2離心機(jī)的類型和主要構(gòu)造18
3.2.1離心機(jī)的類型18
3.2.2離心機(jī)的主要構(gòu)造19
3.3離心方法的選擇21
3.3.1差速離心21
3.3.2密度梯度離心21
3.4離心條件的確定22
3.4.1離心力22
3.4.2離心時(shí)間22
3.4.3溫度23
3.4.4pH值23
第4章色譜技術(shù)24
4.1色譜技術(shù)原理24
4.2色譜的基本概念24
4.2.1固定相與流動(dòng)相24
4.2.2分配系數(shù)與遷移率24
4.2.3分離度（分辨率）25
4.2.4交換容量（或操作容量）26
4.2.5正相色譜與反相色譜26
4.3色譜技術(shù)的分類26
4.3.1按流動(dòng)相固定相分類26
4.3.2按實(shí)驗(yàn)方法分類27
4.3.3按分離的機(jī)制分類27
4.4常用的幾種色譜技術(shù)28
4.4.1紙色譜28
4.4.2薄層色譜30
4.4.3離子交換色譜32
4.4.4凝膠色譜35
4.4.5高效液相色譜41
4.4.6氣相色譜49
4.4.7親和色譜51
第5章電泳技術(shù)60
5.1電泳的基本原理60
5.1.1電荷的來(lái)源60
5.1.2泳動(dòng)度60
5.1.3影響電泳的主要因素61
5.2電泳的分類62
5.2.1按分離原理分類62
5.2.2按分離目的分類63
5.2.3按用途分類63
5.3常用的電泳技術(shù)63
5.3.1紙電泳63
5.3.2醋酸纖維薄膜電泳65
5.3.3瓊脂糖凝膠電泳66
5.3.4聚丙烯酰胺凝膠電泳67
5.3.5毛細(xì)管電泳72
5.3.6免疫電泳技術(shù)73
5.3.7等電聚焦電泳74
5.3.8雙向凝膠電泳77
第二部分生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)
第6章生物化學(xué)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)79
實(shí)驗(yàn)1糖的顏色反應(yīng)和還原性鑒定79
Ⅰ.莫氏（Molisch）反應(yīng)鑒定糖79
Ⅱ.塞氏（Seliwanoff）反應(yīng)鑒定酮糖81
Ⅲ.杜氏（Tollen）反應(yīng)鑒定戊糖82
Ⅳ.糖的還原性鑒定82
實(shí)驗(yàn)2植物組織中可溶性糖含量測(cè)定——蒽酮比色法84
實(shí)驗(yàn)3還原糖和總糖的測(cè)定——3,5-二硝基水楊酸法87
實(shí)驗(yàn)4血糖的定量測(cè)定90
Ⅰ.鄰甲苯胺法測(cè)定血糖含量90
Ⅱ.葡萄糖氧化酶法測(cè)定血糖含量（GOD-PAP法）92
實(shí)驗(yàn)5淀粉的提取、性質(zhì)和含量測(cè)定93
實(shí)驗(yàn)6肝糖原的提取和鑒定96
實(shí)驗(yàn)7粗脂肪的含量測(cè)定——索氏抽提法97
實(shí)驗(yàn)8油脂的化學(xué)性質(zhì)99
Ⅰ.油脂皂化值的測(cè)定99
Ⅱ.油脂酸值的測(cè)定101
Ⅲ.油脂碘值的測(cè)定101
實(shí)驗(yàn)9卵磷脂的提取及鑒定104
實(shí)驗(yàn)10血清總膽固醇的定量測(cè)定105
Ⅰ.磷硫鐵法測(cè)定血清膽固醇106
Ⅱ. Abell法測(cè)定血清膽固醇107
Ⅲ.膽固醇氧化酶法測(cè)定血清膽固醇108
實(shí)驗(yàn)11蛋白質(zhì)的顏色反應(yīng)和沉淀作用110
Ⅰ.蛋白質(zhì)的顏色反應(yīng)110
Ⅱ.蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)113
實(shí)驗(yàn)12蛋白質(zhì)濃度測(cè)定（微量凱氏定氮法）115
實(shí)驗(yàn)13蛋白質(zhì)含量測(cè)定——紫外吸收法117
實(shí)驗(yàn)14蛋白質(zhì)的含量測(cè)定（二）——雙縮脲法、考馬斯亮藍(lán)結(jié)合法、BCA法119
Ⅰ.雙縮脲法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度119
Ⅱ.考馬斯亮藍(lán)結(jié)合法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度121
Ⅲ. BCA法測(cè)定蛋白質(zhì)含量122
實(shí)驗(yàn)15非蛋白氮（NPN）的測(cè)定124
實(shí)驗(yàn)16DNP、DNS-氨基酸的制備和鑒定126
實(shí)驗(yàn)17肽的序列分析——PTH法130
實(shí)驗(yàn)18醋酸纖維薄膜電泳分離血清蛋白132
實(shí)驗(yàn)19SDS-聚丙烯酰胺電泳法測(cè)定蛋白質(zhì)的相對(duì)分子質(zhì)量134
實(shí)驗(yàn)20血清白蛋白的分離與純化138
實(shí)驗(yàn)21葡聚糖凝膠柱色譜分離純化蛋白質(zhì)140
實(shí)驗(yàn)22火箭免疫電泳143
實(shí)驗(yàn)23核酸的含量測(cè)定144
實(shí)驗(yàn)24DNA瓊脂糖凝膠電泳147
實(shí)驗(yàn)25動(dòng)物肝臟中DNA的提取與紫外檢測(cè)148
實(shí)驗(yàn)26CTAB法提取植物基因組DNA150
實(shí)驗(yàn)27酵母RNA的提取與鑒定152
實(shí)驗(yàn)28質(zhì)粒DNA的提取153
實(shí)驗(yàn)29肝臟中谷丙轉(zhuǎn)氨酶的活力測(cè)定155
實(shí)驗(yàn)30過(guò)氧化氫酶米氏常數(shù)的測(cè)定157
實(shí)驗(yàn)31測(cè)定多種因素對(duì)唾液淀粉酶活力的影響159
實(shí)驗(yàn)32豬血中超氧化物歧化酶（SOD）的提取及活力測(cè)定161
實(shí)驗(yàn)33多酚氧化酶的制備和化學(xué)性質(zhì)163
實(shí)驗(yàn)34維生素A的定性測(cè)定164
實(shí)驗(yàn)35維生素B1的定性測(cè)定165
實(shí)驗(yàn)36維生素C的定量測(cè)定（磷鉬酸法）167
第7章綜合應(yīng)用型實(shí)驗(yàn)170實(shí)驗(yàn)37溶菌酶的提純和活力測(cè)定170
實(shí)驗(yàn)38蘆薈多糖的制備和含量測(cè)定172
實(shí)驗(yàn)39發(fā)酵過(guò)程中的無(wú)機(jī)磷和ATP檢測(cè)174
實(shí)驗(yàn)40胰島素和腎上腺素對(duì)血糖濃度的影響176
實(shí)驗(yàn)41葉綠體色素的提取、分離和含量測(cè)定178
實(shí)驗(yàn)42用正交法測(cè)定幾種因素對(duì)牛胰蛋白水解酶活力的影響180
實(shí)驗(yàn)43DNA聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)及產(chǎn)物鑒定（PCR）184
實(shí)驗(yàn)44氣相色譜法檢測(cè)果蔬中有機(jī)氯類和擬除蟲(chóng)菊酯類農(nóng)藥186
實(shí)驗(yàn)45質(zhì)粒DNA的提取、酶切及鑒定189
實(shí)驗(yàn)46漢防己中生物堿的提取、分離和鑒定192
第8章設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)195
實(shí)驗(yàn)47果皮廢棄物中果膠的制備195
實(shí)驗(yàn)48茶葉中茶多酚物質(zhì)的提取與含量測(cè)定196
實(shí)驗(yàn)49蛋白質(zhì)的表達(dá)、分離、純化和鑒定197
附錄198
附錄1常用緩沖液的配制198
附錄2硫酸銨飽和度常用表203
附錄3常見(jiàn)蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量參考值（單位：Da）204
附錄4色譜法常用數(shù)據(jù)及性質(zhì)205
附錄5各類物質(zhì)常用的薄層顯色劑208
附錄6凝膠染料的種類及特點(diǎn)209
參考文獻(xiàn)210