銅調控蛋白CopC探究

第1章銅調控體系及銅蛋白家族
1.1銅在生物體內的必要性和毒性2
1.1.1銅在生物體內的必要性2
1.1.2銅的氧化損傷3
1.2銅穩(wěn)態(tài)機理4
1.2.1細胞對銅的吸收4
1.2.2細胞內銅離子的運輸載體6
1.3革蘭氏陰性菌的銅抑制體系8
1.4Cop家族9
1.4.1CopC溶液結構10
1.4.2CopC晶體結構及銅配位情況14
參考文獻19
第2章突變體MCopC的構建、表達、純化
2.1MCopC的構建26
2.1.1基因體外定點突變主要方法及原理26
2.1.2MCopC的構建29
2.2MCopC的誘導、表達33
2.2.1誘導表達33
2.2.2菌體的破碎33
2.2.3蛋白濃度測定(考馬氏亮藍G250測定法)33
2.3MCopC的純化33
2.3.1離子交換柱層析原理33
2.3.2DE-52纖維素陰離子交換樹脂的處理34
2.3.3洗脫34
2.3.4凝膠柱層析原理35
2.4MCopC的檢驗35
2.4.1TriGly SDSPAGE分析35
2.4.2紫外譜的測定36
2.4.3凝膠色譜及質譜分析38
2.5結論39
參考文獻39
第3章CopC色氨酸殘基的特性
3.1CopC的熒光特征42
3.1.1不同激發(fā)波長下的CopC熒光42
3.1.2突變CopC的熒光42
3.1.3異于Burstein分類的蛋白44
3.1.4CopC晶體結構中色氨酸的位置44
3.2酪氨酸和色氨酸間的能量轉移45
3.3色氨酸在CopC中所處的環(huán)境47
3.4色氨酸突變對蛋白性質的影響48
3.4.1色氨酸突變對Cu(Ⅱ)結合能力的影響48
3.4.2色氨酸突變對構象影響51
3.4.3色氨酸突變對蛋白熱穩(wěn)定性的影響52
3.5結論54
參考文獻55
第4章CopC穩(wěn)定性
4.1GuHCl引起的CopC變性58
4.2兩態(tài)模型60
4.2.1光譜參數(shù)變化60
4.2.2熒光相位圖61
4.2.3銅結合能力變化62
4.3CopC和CopCCu(Ⅱ)穩(wěn)定化能計算63
4.4解折疊動力學64
4.5其他影響因素67
4.5.1pH影響67
4.5.2溫度的影響68
4.6結論69
參考文獻70
第5章萘胺類化合物對CopC構象的干擾
5.1TNS對CopC構象的干擾74
5.1.1TNS對CopC構象的干擾74
5.1.2TNS與CopC間的作用力78
5.1.3機理推測80
5.2α-NA對CopC構象的干擾81
5.2.1α-NA對CopC構象的干擾81
5.2.2NA與CopC作用機理84
5.3結論86
參考文獻86
第6章CopC在Cu(Ⅱ)轉運中的作用
6.1MCopC與CopC-Cu(Ⅱ)反應常數(shù)90
6.2MCopC與CopC-Cu(Ⅱ)反應熱力學92
6.3MCopC與CopC-Cu(Ⅱ)反應動力學93
6.4反應機理95
6.4.1CopC-Cu(Ⅱ)與EDTA的反應96
6.4.2CopC-Cu(Ⅱ)與CDTA的反應97
6.4.3CopC-Cu(Ⅱ)與MCopC的反應98
6.5結論101
參考文獻102
第7章CopC中Cu(Ⅱ)和Cu(Ⅰ)位點協(xié)同性
7.1兩位點協(xié)同性106
7.2結論110
參考文獻110
第8章CopC與Au(Ⅲ)離子的作用
8.1CopC與Au(Ⅲ)相互作用112
8.1.1Au(Ⅲ)引起CopC熒光猝滅112
8.1.2電勢變化113
8.1.3Au(Ⅲ)與CopC的結合常數(shù)114
8.1.4Au(Ⅲ)催化抗壞血酸氧化受CopC的影響118
8.2Au(Ⅲ)結合對CopC構象的影響119
8.3結論121
參考文獻121
第9章銅在配合物與CopC間的轉運
9.1銅配合物\\[Cu(SA)(Phen)Cl·H2O］124
9.1.1銅配合物\\[Cu(SA)(Phen)Cl·H2O\\]結構124
9.1.2配合物光譜特征126
9.1.3配合物與EDTA的反應128
9.2銅配合物\\[Cu(SA)(Phen)Cl·H2O\\]與CopC的反應129
9.2.1光譜研究129
9.2.2循環(huán)伏安分析132
9.3結論133
參考文獻133
縮略語134