免疫學(xué)雙語(yǔ)實(shí)驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)（第二版）

目錄
第一篇 體外抗原抗體反應(yīng)
1.1 傳統(tǒng)的抗原抗體反應(yīng) 3
1.1.1 凝集反應(yīng) 4
實(shí)驗(yàn)一 直接凝集反應(yīng)——玻片凝集反應(yīng)鑒定ABO血型 4
實(shí)驗(yàn)二 間接凝集反應(yīng)——測(cè)定類風(fēng)濕因子的乳膠凝集試驗(yàn) 10
實(shí)驗(yàn)三 間接凝集抑制反應(yīng)——測(cè)定HCG的間接乳膠凝集抑制試驗(yàn)(妊娠試驗(yàn)) 14
1.1.2 沉淀反應(yīng) 18
實(shí)驗(yàn)四 對(duì)流免疫電泳 18
實(shí)驗(yàn)五 免疫電泳 23
1.1.3 補(bǔ)體參與的抗原抗體反應(yīng) 27
實(shí)驗(yàn)六 補(bǔ)體凝集素途徑測(cè)定 27
實(shí)驗(yàn)七 補(bǔ)體溶血空斑試驗(yàn) 32
1.2 功能性細(xì)胞因子和免疫球蛋白的檢測(cè) 39
實(shí)驗(yàn)八 人血清過敏反應(yīng)特異性IgE(SIgE)檢測(cè) 40
1.3 HLA分型技術(shù) 45
實(shí)驗(yàn)九 PCR-SSP HLA分型技術(shù)——檢測(cè)HLA B27基因 46
第二篇 免疫細(xì)胞分離
2.1 免疫細(xì)胞的分離和純化 55
實(shí)驗(yàn)十 外周血單個(gè)核細(xì)胞分離 56
實(shí)驗(yàn)十一 小鼠骨髓來(lái)源巨噬細(xì)胞制備 60
實(shí)驗(yàn)十二 小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的分離 64
實(shí)驗(yàn)十三 樹突狀細(xì)胞的制備 69
實(shí)驗(yàn)十四 自然殺傷細(xì)胞分離 73
實(shí)驗(yàn)十五 磁珠分選小鼠脾臟T細(xì)胞 82
實(shí)驗(yàn)十六 尼龍棉法分離小鼠B細(xì)胞 89
實(shí)驗(yàn)十七 磁珠分選B細(xì)胞 94
實(shí)驗(yàn)十八 小鼠肺泡巨噬細(xì)胞的分離和純化 98
實(shí)驗(yàn)十九 小鼠腸道免疫細(xì)胞獲取 103
第三篇 免疫細(xì)胞功能檢測(cè)
實(shí)驗(yàn)二十 小鼠脾臟NK細(xì)胞活性檢測(cè) 115
實(shí)驗(yàn)二十一 豚鼠T細(xì)胞E玫瑰花環(huán)試驗(yàn) 121
實(shí)驗(yàn)二十二 SAP酶標(biāo)法測(cè)定T細(xì)胞亞群 125
實(shí)驗(yàn)二十三 單向混合淋巴細(xì)胞反應(yīng) 130
實(shí)驗(yàn)二十四 細(xì)胞毒性T細(xì)胞活性測(cè)定 135
第四篇 抗體制備
實(shí)驗(yàn)二十五 多克隆抗體的制備 143
實(shí)驗(yàn)二十六 多克隆抗體的純化 147
實(shí)驗(yàn)二十七 單克隆抗體制備 153
實(shí)驗(yàn)二十八 單鏈抗體(scFv)的構(gòu)建 162
第五篇 常用的免疫相關(guān)疾病動(dòng)物模型
實(shí)驗(yàn)二十九 豚鼠的過敏性休克反應(yīng)模型 175
實(shí)驗(yàn)三十 Ⅰ型超敏反應(yīng)小鼠模型——被動(dòng)皮膚過敏反應(yīng) 181
實(shí)驗(yàn)三十一 Ⅱ型超敏反應(yīng)豚鼠模型——Forssman皮膚血管炎反應(yīng) 186
實(shí)驗(yàn)三十二 Ⅲ型超敏反應(yīng)動(dòng)物模型——Arthus反應(yīng) 190
實(shí)驗(yàn)三十三 Ⅳ型超敏反應(yīng)小鼠模型——二硝基氟苯誘導(dǎo)的遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng) 194
實(shí)驗(yàn)三十四 小鼠實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎的誘導(dǎo) 198
第六篇 免疫學(xué)標(biāo)記技術(shù)
實(shí)驗(yàn)三十五 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) 207
實(shí)驗(yàn)三十六 間接免疫熒光法 212
實(shí)驗(yàn)三十七 免疫膠體金技術(shù)——測(cè)定HBsAg的試紙條雙抗體夾心法 216
實(shí)驗(yàn)三十八 化學(xué)發(fā)光免疫標(biāo)記技術(shù)檢測(cè)乳腺癌患者HER 2 胞外結(jié)構(gòu)域(ECD) 221
實(shí)驗(yàn)三十九 生物發(fā)光技術(shù) 229
第七篇 細(xì)胞凋亡的檢測(cè)技術(shù)和流式細(xì)胞術(shù)
實(shí)驗(yàn)四十 細(xì)胞凋亡的DNA瓊脂糖凝膠電泳分析 237
實(shí)驗(yàn)四十一 流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡——Annexin V/PI雙染色法 243
實(shí)驗(yàn)四十二 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)小鼠T淋巴細(xì)胞亞群(CD4+/CD8+T細(xì)胞) 248
實(shí)驗(yàn)四十三 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD4+T細(xì)胞上CXCR4的表達(dá) 257
實(shí)驗(yàn)四十四 流式細(xì)胞儀檢測(cè)巨噬細(xì)胞胞內(nèi)細(xì)胞因子 262
第八篇 糖免疫技術(shù)
實(shí)驗(yàn)四十五 IgG糖鏈檢測(cè) 271
實(shí)驗(yàn)四十六 免疫球蛋白A1糖鏈的檢測(cè) 275
實(shí)驗(yàn)四十七 細(xì)胞表面N糖蛋白的代謝標(biāo)記及檢測(cè) 280
實(shí)驗(yàn)四十八 胞內(nèi)O-GlcNAc糖蛋白的標(biāo)記及檢測(cè) 284
主要參考文獻(xiàn) 289
附錄 293
附錄一 常用試劑和培養(yǎng)液 294
附錄二 實(shí)驗(yàn)常用小鼠的品系及模型 307
Contents
Chapter One Antigen and Antibody Reaction in vitro
1.1 Classical Antigen and Antibody Reaction in vitro 3
1.1.1 Agglutination Reaction 7
Exp.1 Direct Agglutination Reaction — Slide Agglutination Test for Blood Type Detection 7
Exp.2 Indirect Agglutination Reaction — Latex Agglutination Test for Detection of RF 12
Exp.3 Indirect Agglutination Inhibition Reactions — Indirect Latex Agglutination Inhibition Test for the HCG Pregnancy Test 16
1.1.2 Precipitation Reaction 20
Exp.4 Countercurrent Electrophoresis 20
Exp.5 Immunoelectrophoresis 25
1.1.3 Antigen and Antibody Reaction Involved by Complement 29
Exp.6 Assay of Complement Lectin Pathway 29
Exp.7 Hemolytic Plaque Assay 35
1.2 Assay of Functional Cytokine and Immunoglobin 39
Exp.8 Human Serum Specific IgE (SIgE) Assay for Anaphylaxis 42
1.3 HLA Typing Techniques 45
Exp.9 HLA Typing for B27 with PCR SSP 49
Chapter Two Isolation of Immune Cells
2.1 Separation and Purification of Immune Cells 55
Exp.10 Separation of Mononuclear Cells from Whole Peripheral Blood 58
Exp.11 Preparation of Mouse Bone Marrow Derived Macrophages 62
Exp.12 Isolation of Mouse Peritoneal Macrophages 66
Exp.13 Generation Isolation of Dendritic Cells 71
Exp.14 Isolation of Natural Killer Cells 77
Exp.15 Isolation of T Cell from Mouse Spleen Using Magnetic Beads 85
Exp.16 Isolation and Purification of B Cells by Nylon Wool 91
Exp.17 Isolation and Purification of B Cells by MACS 96
Exp.18 Isolation and Purification of Murine Alveolar Macrophages 100
Exp.19 Isolation of Immune Cells from the Mouse Intestinal Immune System 107
Chapter Three Assay for the Functions of Immune Cells
Exp.20 Mouse Spleen NK Cells Activity Assay 118
Exp.21 Erythrocyte Rosette Forming Cell Test (ERFC) for Guinea Pig T Cells 123
Exp.22 Detection of T Lymphocyte Subgroups in Peripheral Blood by the SAP 127
Exp.23 One way Mixed Lymphocyte Reaction 132
Exp.24 Measurement of CTL Activity 137
Chapter Four Preparation of Antibody
Exp.25 Preparation of Polyclonal Antibody 145
Exp.26 Purification of Polyclonal Antibody 150
Exp.27 Preparation of Monoclonal Antibody 157
Exp.28 Generation of scFv 167
Chapter Five Animal Models of Immuno related Diseases
Exp.29 Model of Anaphylaxis Shock in Guinea Pig 178
Exp.30 Murine Model of Type Ⅰ Hypersensitivity Reaction—Passive Cutaneous Anaphylaxis Model 183
Exp.31 Guinea Pig Type Ⅱ Hypersensitivity Reaction—Forssman Cutaneous Vasculitis Response 188
Exp.32 Rabbit Type Ⅲ Hypersensitivity Reaction—Arthus Reaction 192
Exp.33 Mouse Type Ⅳ Hypersensitivity Reaction—Dinitrofluorobenzene induced Delayed Type Hypersensitivity 196
Exp.34 Induction of Mouse Experimental Autoimmune Encephalomyelitis 201
Chapter Six Immunolabeling Technique
Exp.35 Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA) 209
Exp.36 Indirect Immunofluorescence Assay 214
Exp.37 HBsAg Test Trip by Double Antigen Sandwich Immune Colloidal Gold Strip Technique 218
Exp.38 Detection of HER 2 Extracellular Domain of Breast Cancer Patients by Chemiluminescence Immunoassay 225
Exp.39 Bioluminescence Assay 232
Chapter Seven Flow Cytometry and Cell Apoptosis Detection Technique
Exp.40 Thymocytes Apoptosis Assay by Agar