內(nèi)生菌研究方法

第一章內(nèi)生菌的概述/1
第一節(jié)內(nèi)生菌的定義與種類(lèi)1
一、內(nèi)生菌的定義1
二、內(nèi)生菌的種類(lèi)2
第二節(jié)內(nèi)生菌的活性與應(yīng)用4
一、內(nèi)生菌的活性5
二、內(nèi)生菌的應(yīng)用8
參考文獻(xiàn)9

第二章內(nèi)生菌研究方法的前期準(zhǔn)備/14
第一節(jié)顯微鏡基礎(chǔ)知識(shí)及使用14
一、普通光學(xué)顯微鏡14
二、相差顯微鏡16
三、熒光顯微鏡16
四、掃描電子顯微鏡20
五、透射電子顯微鏡21
六、原子力顯微鏡22
第二節(jié)常規(guī)器具和設(shè)備23
一、常用器皿23
二、接種工具24
三、常規(guī)儀器設(shè)備24
第三節(jié)常規(guī)器具的洗滌25
一、洗滌劑26
二、器皿的洗滌26
三、載玻片和蓋玻片的洗滌26
第四節(jié)器皿的包扎和棉塞的制作27
一、移液管的包扎27
二、培養(yǎng)皿的包扎27
三、錐形瓶的包扎27
四、棉塞的制作28
第五節(jié)常規(guī)滅菌方法28
一、加熱滅菌法28
二、過(guò)濾除菌法30
三、輻射滅菌法30
四、化學(xué)滅菌法31
第六節(jié)常規(guī)接種方法31
一、劃線接種法31
二、穿刺接種法32
三、點(diǎn)接種法32
第七節(jié)培養(yǎng)基及其配制32
一、培養(yǎng)基的成分32
二、培養(yǎng)基的種類(lèi)33
三、培養(yǎng)基及其配制34
參考文獻(xiàn)36

第三章內(nèi)生菌的分離/38
第一節(jié)樣品的收集與處理38
第二節(jié)樣品的表面消毒39
第三節(jié)內(nèi)生菌分離培養(yǎng)基的選擇41
一、內(nèi)生真菌分離培養(yǎng)基的選擇41
二、內(nèi)生細(xì)菌分離培養(yǎng)基的選擇42
三、內(nèi)生放線菌分離培養(yǎng)基的選擇43
第四節(jié)內(nèi)生菌的分離方法44
一、植物樣品的分離方法44
二、海洋生物樣品的分離方法45
三、昆蟲(chóng)等其他生物樣品的分離方法46
第五節(jié)內(nèi)生菌的分離實(shí)例46
實(shí)例一三叉苦內(nèi)生真菌的分離46
實(shí)例二砂仁內(nèi)生細(xì)菌的分離47
實(shí)例三變?nèi)~木、陰香內(nèi)生放線菌的分離47
實(shí)例四珊瑚內(nèi)生菌的分離48
實(shí)例五白蟻成蟲(chóng)內(nèi)生菌的分離48
參考文獻(xiàn)48

第四章內(nèi)生菌的鑒定/51
第一節(jié)內(nèi)生細(xì)菌的鑒定51
一、細(xì)菌的特征及分類(lèi)依據(jù)51
二、細(xì)菌鑒定的一般程序51
三、內(nèi)生細(xì)菌鑒定方法52
四、細(xì)菌常用分類(lèi)系統(tǒng)簡(jiǎn)介及檢索80
第二節(jié)內(nèi)生放線菌的鑒定87
一、放線菌的分類(lèi)研究87
二、內(nèi)生放線菌鑒定方法91
三、內(nèi)生鏈霉菌種群特征99
四、放線菌分類(lèi)系統(tǒng)99
第三節(jié)內(nèi)生真菌的鑒定103
一、真菌的特征及分類(lèi)依據(jù)103
二、內(nèi)生真菌的鑒定104
參考文獻(xiàn)113

第五章內(nèi)生菌的培養(yǎng)與發(fā)酵/116
第一節(jié)內(nèi)生菌的培養(yǎng)116
一、固體培養(yǎng)法116
二、液體培養(yǎng)法118
第二節(jié)連續(xù)培養(yǎng)技術(shù)119
第三節(jié)同步培養(yǎng)技術(shù)120
一、選擇法120
二、誘導(dǎo)法121
第四節(jié)高密度培養(yǎng)技術(shù)122
一、固定化培養(yǎng)122
二、補(bǔ)料分批培養(yǎng)123
三、膜過(guò)濾培養(yǎng)技術(shù)123
第五節(jié)固體發(fā)酵技術(shù)124
第六節(jié)內(nèi)生菌的發(fā)酵實(shí)例125
實(shí)例一三椏苦內(nèi)生真菌SCK-Y9同步生長(zhǎng)技術(shù)125
實(shí)例二變?nèi)~木內(nèi)生細(xì)菌BYG2-5膜過(guò)濾培養(yǎng)125
實(shí)例三鏈霉菌HN6固體發(fā)酵技術(shù)125
參考文獻(xiàn)127

第六章內(nèi)生菌的定殖研究/128
第一節(jié)內(nèi)生菌的侵染與定殖128
一、植物內(nèi)生菌的侵染方式128
二、植物內(nèi)生菌的定殖129
第二節(jié)內(nèi)生菌的定殖檢測(cè)129
一、抗生素標(biāo)記法130
二、免疫學(xué)方法131
三、基因標(biāo)記法143
四、特異性寡核苷酸片段標(biāo)記法146
五、基因芯片法146
六、熒光定量PCR檢測(cè)法147
第三節(jié)內(nèi)生菌的定殖研究實(shí)例147
參考文獻(xiàn)149

第七章內(nèi)生菌的活性評(píng)價(jià)方法/151
第一節(jié)內(nèi)生菌殺蟲(chóng)活性評(píng)價(jià)方法151
一、觸殺作用評(píng)價(jià)方法151
二、胃毒作用評(píng)價(jià)方法152
三、螨類(lèi)的評(píng)價(jià)方法154
四、酶活評(píng)價(jià)方法155
第二節(jié)內(nèi)生菌抑菌活性評(píng)價(jià)方法166
一、內(nèi)生菌離體活性評(píng)價(jià)方法166
二、內(nèi)生菌組織活性評(píng)價(jià)方法171
三、內(nèi)生菌盆栽活性評(píng)價(jià)方法174
第三節(jié)內(nèi)生菌抗氧化活性評(píng)價(jià)方法176
一、TLC法檢測(cè)自由基清除活性176
二、高價(jià)鐵離子還原作用176
三、DPPH自由基清除作用176
四、ABTS自由基清除作用177
五、超氧陰離子清除作用177
六、羥基自由基清除作用177
七、過(guò)氧化氫清除作用178
八、實(shí)例蜂巢珊瑚內(nèi)生真菌的抗氧化活性研究178
第四節(jié)內(nèi)生菌誘導(dǎo)靶標(biāo)菌細(xì)胞凋亡評(píng)價(jià)方法181
一、對(duì)細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激的評(píng)價(jià)181
二、對(duì)線粒體膜電位的評(píng)價(jià)182
三、對(duì)靶標(biāo)菌菌體內(nèi)抗氧化酶系的評(píng)價(jià)182
四、對(duì)細(xì)胞內(nèi)還原型谷胱甘肽含量的評(píng)價(jià)185
五、對(duì)小靶標(biāo)菌細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)186
參考文獻(xiàn)187

第八章內(nèi)生菌的促生作用/190
第一節(jié)直接促生作用190
一、生長(zhǎng)素190
二、固氮作用192
三、解磷作用192
四、解鉀作用193
五、分泌鐵載體193
第二節(jié)間接促生作用194
一、拮抗作用194
二、誘導(dǎo)系統(tǒng)抗性194
第三節(jié)促生作用檢測(cè)198
一、形態(tài)指標(biāo)檢測(cè)198
二、生理指標(biāo)檢測(cè)199
第四節(jié)互作效應(yīng)202
第五節(jié)內(nèi)生菌促生作用研究實(shí)例203
實(shí)例一鏈霉菌HN6對(duì)香蕉的促生作用研究203
實(shí)例二放線菌HN20對(duì)黃瓜、生菜的促生作用研究205
實(shí)例三放線菌WZS1-1與WZS2-1菌株的促生作用測(cè)定208
參考文獻(xiàn)211

第九章內(nèi)生菌代謝產(chǎn)物的研究/213
第一節(jié)內(nèi)生菌代謝產(chǎn)物的分離213
一、小分子代謝產(chǎn)物的提取分離213
二、蛋白質(zhì)的提取分離220
三、多糖的提取分離223
第二節(jié)內(nèi)生菌代謝產(chǎn)物的鑒定225
一、定性鑒定225
二、紅外光譜分析法227
三、核磁共振波譜法228
四、質(zhì)譜分析法231
五、圓二色光譜分析法232
第三節(jié)真菌Xylaria feejeenisis的代謝產(chǎn)物研究232
參考文獻(xiàn)236

第十章內(nèi)生菌的應(yīng)用研究/237
第一節(jié)內(nèi)生菌可濕性粉劑的研制237
一、HN6可濕性粉劑的制備方法237
二、可濕性粉劑的制備方法優(yōu)化239
三、HN6可濕性粉劑對(duì)香蕉枯萎病的盆栽防治效果240
四、HN6可濕性粉劑對(duì)香蕉枯萎病的田間防治效果241
第二節(jié)內(nèi)生菌可溶性液劑的研制242
第三節(jié)內(nèi)生菌微生物肥料的研制243
一、內(nèi)生菌液體肥料的研制244
實(shí)例一枯草芽孢桿菌HBS-1和白刺鏈霉菌NLG-3的液體肥料244
實(shí)例二HN20的液體肥料244
實(shí)例三黃色鏈霉菌BYM-2的液體肥料244
實(shí)例四蜜糖草固氮螺菌SRJ2-4的液體肥料245
二、內(nèi)生菌固體肥料的研制245
實(shí)例一含熒光假單胞桿菌YXG2-3的復(fù)合固體肥料245
實(shí)例二含芽孢桿菌HBS-1的復(fù)合固體肥料246
實(shí)例三含岸濱芽孢桿菌BYG2-5的復(fù)合固體肥料246
第四節(jié)內(nèi)生菌保鮮劑的研制247
一、香蕉防腐保鮮劑的應(yīng)用247
二、芒果防腐保鮮劑的應(yīng)用248
第五節(jié)內(nèi)生菌菌劑的檢測(cè)249
參考文獻(xiàn)252

第十一章內(nèi)生菌菌種的保藏/253
第一節(jié)菌種保藏的基本原理253
第二節(jié)菌種保藏的基本方法253
一、斜面?zhèn)鞔２胤?53
二、礦物油保藏法254
三、麩皮保藏法254
四、沙土管保藏法255
五、土壤培養(yǎng)保藏法256
六、蒸餾水保藏法256
七、甘油懸液保藏法256
八、冷凍干燥保藏法257
九、液氮超低溫保藏法257
十、素瓷珠保藏法258
十一、瓊脂穿刺保藏法258
十二、固定化保藏法258
十三、宿主保藏法259
第三節(jié)菌種保藏的注意事項(xiàng)259
參考文獻(xiàn)260

附錄262
附錄一培養(yǎng)基及配方262
附錄二常用酸堿指示劑的配制270
附錄三常用消毒劑的配制271