動物細胞培養(yǎng)技術(shù)

第一章緒論001
第一節(jié)動物細胞培養(yǎng)發(fā)展簡史001
第二節(jié)細胞培養(yǎng)的特點與應(yīng)用003
一、細胞培養(yǎng)的特點003
二、細胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用研究005
第三節(jié)細胞培養(yǎng)生物學008
一、體外培養(yǎng)細胞與體內(nèi)細胞的差異與分化008
二、體外培養(yǎng)細胞的類型009
三、體外培養(yǎng)細胞的生長與增殖過程012
四、細胞周期017
第四節(jié)細胞培養(yǎng)條件與影響因素020
一、無菌環(huán)境020
二、細胞分離方法021
三、細胞培養(yǎng)溫度022
四、細胞培養(yǎng)基的成分022
五、接種密度023
六、培養(yǎng)基的pH值024
七、細胞的凍存與復蘇024
八、附著底物025
九、細胞供體年齡027

第二章培養(yǎng)用液與培養(yǎng)基028
第一節(jié)培養(yǎng)基的基本性質(zhì)028
一、營養(yǎng)成分028
二、pH值030
三、滲透壓030
四、緩沖能力030
五、促生長因子及激素031
六、無毒、無污染031
第二節(jié)水和平衡鹽溶液032
一、水032
二、平衡鹽溶液032
第三節(jié)天然培養(yǎng)基034
一、血清034
二、血漿039
三、雞胚浸出液040
四、水解乳蛋白041
五、膠原042
第四節(jié)合成培養(yǎng)基043
一、基本組分043
二、常用細胞培養(yǎng)基046
第五節(jié)細胞培養(yǎng)其它常用液053
一、平衡鹽溶液（Balanced salt solution，BSS）053
二、消化液053
三、pH調(diào)整液055
四、抗生素055
五、谷氨酰胺補充液056
六、二肽谷氨酰胺（L-丙氨酰-L-谷氨酰胺）056

第三章培養(yǎng)用設(shè)施與設(shè)備處理057
第一節(jié)細胞培養(yǎng)實驗室057
一、無菌操作區(qū)058
二、孵育區(qū)062
三、制備區(qū)062
四、儲藏區(qū)062
五、清洗和消毒滅菌區(qū)062
第二節(jié)細胞培養(yǎng)用儀器及設(shè)備062
一、CO2培養(yǎng)箱063
二、超凈工作臺/生物安全柜063
三、純水系統(tǒng)063
四、細胞冷凍儲存器064
五、冰箱065
六、恒溫水浴065
七、離心機066
八、顯微鏡066
九、高壓蒸汽滅菌器066
十、電熱烘干箱067
十一、特殊設(shè)備067
第三節(jié)細胞培養(yǎng)用器械及器皿068
第四節(jié)培養(yǎng)用品的處理071
一、培養(yǎng)用品的清洗071
二、包裝075
三、消毒滅菌076
四、消毒方法的選擇081

第四章原代細胞培養(yǎng)技術(shù)083
第一節(jié)原代培養(yǎng)基本知識083
一、原代細胞的分離方法084
二、原代細胞的純化方法086
三、原代細胞培養(yǎng)086
四、原代細胞的生物學鑒定086
五、注意事項087
第二節(jié)上皮組織細胞的培養(yǎng)089
一、試劑與器材090
二、原代細胞的分離和純化090
三、腸上皮細胞的鑒定092
四、注意事項093
第三節(jié)結(jié)締組織細胞的培養(yǎng)094
一、疏松結(jié)締組織095
二、致密結(jié)締組織095
三、脂肪組織095
四、網(wǎng)狀組織096
五、雞成纖維細胞的原代培養(yǎng)096
第四節(jié)肌組織細胞的培養(yǎng)100
一、骨骼肌100
二、平滑肌101
三、心肌101
四、骨骼肌衛(wèi)星細胞的培養(yǎng)101
第五節(jié)神經(jīng)組織細胞的培養(yǎng)104
一、神經(jīng)細胞的原代培養(yǎng)105
二、神經(jīng)細胞組織的培養(yǎng)105
三、神經(jīng)細胞原代培養(yǎng)的意義108
第六節(jié)干細胞的培養(yǎng)109
一、干細胞的分類109
二、胚胎干細胞的培養(yǎng)110
三、成體干細胞的培養(yǎng)114

第五章細胞建系、傳代培養(yǎng)技術(shù)118
第一節(jié)正常細胞系的建立和鑒定118
一、細胞系的建立118
二、細胞系的鑒定119
第二節(jié)癌細胞系的建立和鑒定121
一、細胞系的建立121
二、細胞系的鑒定122
第三節(jié)傳代培養(yǎng)基本知識122
一、傳代培養(yǎng)的過程124
二、Vero細胞的培養(yǎng)128
三、HeLa細胞的培養(yǎng)131
第四節(jié)傳代細胞的大規(guī)模培養(yǎng)133
一、懸浮規(guī)模培養(yǎng)134
二、單層規(guī)模培養(yǎng)134
三、動物細胞大規(guī)模培養(yǎng)的方法135
四、動物大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用144
五、動物細胞生物反應(yīng)器145
六、大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)的操作方式149

第六章動物細胞的凍存、復蘇及污染檢測157
第一節(jié)動物細胞凍存157
一、凍存的必要性157
二、冷凍保存的原理158
三、影響凍存細胞活性的因素159
四、細胞凍存方法162
第二節(jié)動物細胞復蘇167
一、細胞復蘇的原理167
二、細胞復蘇的方法168
三、細胞復蘇的要點169
第三節(jié)細胞培養(yǎng)污染檢測170
一、可見微生物污染檢測170
二、支原體檢測171
三、病毒污染檢測171

第七章細胞融合與單克隆抗體技術(shù)173
第一節(jié)單克隆抗體的概念173
第二節(jié)雜交瘤技術(shù)的誕生174
第三節(jié)單克隆抗體的制備176
一、動物免疫177
二、細胞融合180
三、雜交瘤細胞篩選186
四、雜交瘤細胞的克隆化197
五、雜交瘤細胞的凍存與復蘇199
六、單抗特性的鑒定201
第四節(jié)單克隆抗體的生產(chǎn)208
一、動物體內(nèi)生產(chǎn)單抗的方法208
二、體外培養(yǎng)生產(chǎn)單抗的方法209
三、雜交瘤細胞的無血清培養(yǎng)211
第五節(jié)單克隆抗體的純化212
一、腹水型單抗的純化212
二、單抗的粗提213
第六節(jié)單克隆抗體的標記215
一、酶標記215
二、熒光素標記219
三、同位素標記220
四、生物素標記222
五、其它標記技術(shù)223

附錄224
一、常用的動物細胞系224
二、細胞培養(yǎng)常用術(shù)語228
三、細胞培養(yǎng)常用縮寫詞237
四、常用培養(yǎng)基成分和配方239
五、細胞計數(shù)（臺盼藍細胞染色計數(shù)）248
六、細胞生長曲線的繪制250

參考文獻253