石榴多酚的生物學(xué)活性研究

第1章 石榴多酚的生物學(xué)活性概述 1
1.1 石榴概述 1
1.2 石榴多酚及其主要活性成分 2
1.3 石榴多酚的生物學(xué)活性 4
第2章 石榴汁降血脂的研究 12
2.1 材料與儀器 13
2.1.1 試驗(yàn)材料 13
2.1.2 試驗(yàn)儀器 14
2.2 試驗(yàn)方法 14
2.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及飼料配方 14
2.2.2 總酚含量的測(cè)定 15
2.2.3 黃酮類物質(zhì)含量測(cè)定 16
2.2.4 原花青素含量的測(cè)定 17
2.2.5 清除DPPH自由基的能力測(cè)定 18
2.2.6 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及處理 19
2.2.7 血清血脂指標(biāo)測(cè)定 20
2.2.8 肝臟指數(shù)的測(cè)定 21
2.2.9 血液抗氧化指標(biāo)的測(cè)定 21
2.2.10 主動(dòng)脈弓病理切片HE染色 21
2.2.11 數(shù)據(jù)處理 21
2.3 結(jié)果與分析 22
2.3.1 石榴汁多酚類成分含量 22
2.3.2 石榴汁清除DPPH自由基的能力 23
2.3.3 石榴汁對(duì)AS大鼠血脂的影響 24
2.3.4 石榴汁對(duì)AS大鼠ALT、AST和肝臟指數(shù)的影響 25
2.3.5 石榴汁對(duì)大鼠CRP的影響 26
2.3.6 石榴汁對(duì)大鼠血清總膽汁酸的影響 27
2.3.7 石榴汁對(duì)AS大鼠動(dòng)脈粥樣硬化指數(shù)的影響 29
2.3.8 石榴汁對(duì)AS大鼠脂質(zhì)和蛋白質(zhì)氧化的影響 29
2.3.9 主動(dòng)脈弓標(biāo)本HE染色 31
2.4 討論 32
2.5 小結(jié) 34
第3章 石榴多酚抑制泡沫細(xì)胞脂質(zhì)積累的研究 35
3.1 材料與儀器 37
3.1.1 試驗(yàn)材料與試劑 37
3.1.2 試驗(yàn)儀器 39
3.2 試驗(yàn)方法 41
3.2.1 試劑配制 41
3.2.2 石榴皮多酚提取物高效液相色譜分析 43
3.2.3 小鼠巨噬細(xì)胞Raw264.7的培養(yǎng) 43
3.2.4 石榴皮多酚對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞Raw264.7存活率的影響 44
3.2.5 Raw264.7巨噬泡沫細(xì)胞模型的建立 45
3.2.6 石榴皮多酚對(duì)Raw264.7泡沫細(xì)胞內(nèi)膽固醇蓄積的影響 45
3.2.7 石榴皮多酚對(duì)泡沫細(xì)胞清道夫受體基因mRNA表達(dá)的影響 47
3.2.8 石榴皮多酚對(duì)泡沫細(xì)胞清道夫受體蛋白表達(dá)的影響 53
3.2.9 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析 57
3.3 結(jié)果與分析 57
3.3.1 HPLC鑒定石榴皮多酚組成成分 57
3.3.2 石榴皮多酚對(duì)Raw264.7巨噬細(xì)胞的安全濃度 57
3.3.3 Raw264.7巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞模型的建立 59
3.3.4 石榴皮多酚對(duì)泡沫細(xì)胞內(nèi)膽固醇含量的影響 60
3.3.5 石榴皮多酚對(duì)泡沫細(xì)胞清道夫受體CD36和SR-A mRNA和蛋白表達(dá)的影響 63
3.3.6 對(duì)PPARγ的影響 67
3.4 討論 69
3.5 小結(jié) 72
第4章 石榴多酚促進(jìn)泡沫細(xì)胞膽固醇流出的研究 73
4.1 材料與儀器 81
4.1.1 試驗(yàn)材料 81
4.1.2 試驗(yàn)儀器 81
4.2 試驗(yàn)方法 83
4.2.1 試劑配制 83
4.2.2 Raw264.7巨噬泡沫細(xì)胞模型的建立 83
4.2.3 石榴皮多酚對(duì)ApoA-1及HDL介導(dǎo)的泡沫細(xì)胞膽固醇流出影響 83
4.2.4 石榴皮多酚對(duì)泡沫細(xì)胞膽固醇流出相關(guān)基因表達(dá)的影響 84
4.2.5 膽固醇流出相關(guān)基因引物設(shè)計(jì) 84
4.2.6 細(xì)胞ACAT和nCEH 蛋白表達(dá)及其酶活性的檢測(cè) 85
4.2.7 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析 85
4.3 結(jié)果與分析 86
4.3.1 石榴皮多酚對(duì)ApoA-1及HDL介導(dǎo)的泡沫細(xì)胞膽固醇流出影響 86
4.3.2 石榴皮多酚對(duì)泡沫細(xì)胞ABCA1、ABCG1 mRNA和蛋白表達(dá)影響 87
4.3.3 石榴皮多酚對(duì)泡沫細(xì)胞SR-B1蛋白表達(dá)影響 91
4.3.4 石榴皮多酚對(duì)泡沫細(xì)胞LXRα基因表達(dá)影響 92
4.3.5 石榴皮多酚對(duì)泡沫細(xì)胞ACAT和nCEH的影響 96
4.4 討論 99
4.5 小結(jié) 102
第5章 安石榴苷、鞣花酸和沒食子酸抑制泡沫細(xì)胞形成的研究 103
5.1 材料和儀器 104
5.1.1 試驗(yàn)材料 104
5.1.2 試驗(yàn)儀器 104
5.2 試驗(yàn)方法 106
5.2.1 試劑配制 106
5.2.2 PC、EA和GA對(duì)Raw264.7巨噬細(xì)胞存活率的影響 106
5.2.3 PC、EA和GA對(duì)泡沫細(xì)胞膽固醇蓄積和流出的影響 107
5.2.4 PC對(duì)泡沫細(xì)胞膽固醇流入和流出相關(guān)蛋白表達(dá)的影響 108
5.2.5 統(tǒng)計(jì)分析 108
5.3 結(jié)果與分析 109
5.3.1 PC、EA、GA對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞Raw264.7的安全濃度 109
5.3.2 PC、EA和GA對(duì)泡沫細(xì)胞內(nèi)膽固醇含量的影響 110
5.3.3 PC、EA和GA對(duì)泡沫細(xì)胞清道夫受體CD36基因蛋白表達(dá)的影響 113
5.3.4 PC、EA和GA對(duì)泡沫細(xì)胞膽固醇流出的影響 115
5.3.5 PC、EA和GA對(duì)Raw264.7巨噬泡沫細(xì)胞PPARγ、LXRα、ABCA1和ABCG1蛋白表達(dá)的影響 117
5.4 討論 120
5.5 小結(jié) 122
第6章 石榴鞣花酸抗肺癌的研究 123
6.1 材料與儀器 124
6.1.1 試驗(yàn)材料 124
6.1.2 試驗(yàn)儀器 124
6.2 試驗(yàn)方法 125
6.2.1 石榴鞣花酸提取物溶液配制及細(xì)胞培養(yǎng) 125
6.2.2 細(xì)胞增殖抑制試驗(yàn) 126
6.2.3 DAPI染色法分析細(xì)胞形態(tài) 126
6.2.4 細(xì)胞周期的檢測(cè) 127
6.2.5 細(xì)胞凋亡率的檢測(cè) 127
6.2.6 細(xì)胞內(nèi)蛋白表達(dá)量的測(cè)定 128
6.2.7 數(shù)據(jù)分析 129
6.3 結(jié)果與分析 130
6.3.1 石榴鞣花酸提取物對(duì)A549肺癌細(xì)胞增殖的抑制作用 130
6.3.2 石榴鞣花酸提取物對(duì)A549肺癌細(xì)胞形態(tài)的影響 131
6.3.3 石榴鞣花酸提取物對(duì)A549肺癌細(xì)胞周期的影響 132
6.3.4 石榴鞣花酸提取物對(duì)A549肺癌細(xì)胞凋亡的影響 133
6.3.5 蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)量的結(jié)果 135
6.4 小結(jié) 137
附錄 縮寫詞中英文對(duì)照表 138
參考文獻(xiàn) 141